В детстве Анастасию Задорожную отдали в музыкальную школу, где она готовилась стать пианисткой, но затем стала солисткой старшей группы Детского музыкального ансамбля «Непоседы». В 1999 году актриса дебютировала в сериале «Простые истины», а в 2002 поступила на актерский факультет ГИТИС. После выхода сериала «Клуб» в 2006 году её карьера в кино начала активно развиваться.

В последующие годы Задорожная снималась в таких проектах, как «Трое сверху» (2006), «Матрешки-2» (2007), «Преступление будет раскрыто» (2008), «Любовь в большом городе» (2008) и его продолжении 2010 года. В сериалах «Матрешки-2» (2007) и «Если небо молчит» (2010) актриса появлялась в обнажённом виде.